カラム

疎水クロマトグラフィー用カラム
BioPro HIC BF

BioPro HIC BFは担体の疎水性を高く設計した疎水クロマトグラフィー用カラムです。疎水性の小さいタンパク質の分離に適しています。

仕様
基材 親水性ノンポーラスポリマー
粒子径 4 μm
官能基 ブチル基
使用温度範囲 10~60°C
使用pH範囲 2~12
使用圧力上限 20 MPa
製品の特長
  • 非変性条件で抗体やタンパク質の分離が可能
  • 疎水性の小さいタンパク質の分離に有効

固定相の疎水性が高いHIC用カラム

BioPro HIC BFは担体を高疎水性設計しているため、BioPro HIC HTや他社カラムと比較して、タンパク質の保持が大きくなります。疎水性が小さく、他のカラムでは保持できないようなタンパク質の分離に有効です。

Column 100 X 4.6 mmI.D.
Eluent

A) 100 mM NaH2PO4-Na2HPO4 (pH 7.0) containing 2.0 M (NH4)2SO4
B) 100 mM NaH2PO4-Na2HPO4 (pH 7.0)
0%B (0-1 min), 0-100%B (1-11 min), 100%B (11-15 min)

Flow rate 0.5 mL/min
Temperature 25ºC
Detection UV at 280 nm
Injection 15 µL
Sample

1. Adalimumab (0.5 mg/mL)
2. Trastuzumab (0.5 mg/mL)

疎水性の小さいタンパク質の分離に有効

抗体医薬品の特性解析の一つである、酸化体の分析例を示します。酸化体のピークは、非酸化抗体よりも低疎水性側に溶出するため、タンパク質の保持力が強いBioPro HIC BFが適しています。

酸化体の分析

tert-Butyl hydroperoxide (t-BHP)を用いてモノクローナル抗体(NIST mAb)のメチオニン残基を酸化し、酸化体をBioPro HIC BFを用いて分析しました。
移動相の塩に(NH4)2SO4を用いたクロマトグラム(a)では、非酸化抗体の前に酸化体と推測される4本のピークが観測されました。メチオニン残基の酸化により構造が変化したことで、疎水性が変化したと考えられます。
塩をNaClにすると(クロマトグラム(b))さらに分離が向上し、8本の酸化体ピークが検出できました。

Column BioPro HIC BF 4 μm, 100 X 4.6 mmI.D.
Eluent A) 100 mM NaH2PO4-Na2HPO4 (pH 7.0)
 containing salt
B) 100 mM NaH2PO4-Na2HPO4 (pH 7.0)
40-80%B (0-40 min), 80%B (40-45 min)
Flow rate 0.3 mL/min
Temperature 25ºC
Detection UV at 280 nm
Injection

5 µL (1.0 mg/mL)

断片化した酸化体の分析

NIST mAbの酸化体および非酸化体をパパイン消化によりFabとFcに断片化したフラグメントを分析しました。
非酸化体の分析においてFabとFcの分離が確認できました。酸化処理したフラグメントの分析では、 FabおよびFcの低疎水性側にそれぞれの酸化体と推測されるピークが検出されました*。
*Journal of Chromatography A, 2008, 1214, 81-89

Column BioPro HIC BF 4 μm, 100 X 4.6 mmI.D.
Eluent A) 100 mM NaH2PO4-Na2HPO4 (pH 7.0)
 containing 2.0 M (NH4)2SO4
B) 100 mM NaH2PO4-Na2HPO4 (pH 7.0)
40-80%B (0-10 min)
Flow rate 1.0 mL/min
Temperature 25ºC
Detection UV at 280 nm
Injection

5 µL (0.5 mg/mL)

高負荷でも良好なピーク形状

BioPro HIC BFカラムは、サンプルの負荷量を上げても良好なピーク形状を示します。このため、トータル負荷量を上げてマイナーピークまで検出したい場合や、小スケールの精製にも有効です。

Column BioPro HIC BF 4 μm, 100 X 4.6 mmI.D.
Eluent

A) 100 mM NaH2PO4-Na2HPO4 (pH 7.0)
 containing 2.0 M (NH4)2SO4
B) 100 mM NaH2PO4-Na2HPO4 (pH 7.0)
60%B (0-0.5 min), 60-100%B (0.5-7.5 min),
100%B (7.5-10 min)

Flow rate 1.2 mL/min
Temperature 30ºC
Detection UV at 280 nm
Sample

Humanized monoclonal IgG (2.5 mg/mL)

オーダリングインフォメーション

粒子径
(μm)
カラムサイズ
内径 X 長さ (mm)
製品番号 価格
(円)
4 4.6 X 100 BHB00S04-1046WT 150,000

上記以外のサイズについてはお問い合わせください。分取カラムも対応可能です。

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